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使用鐵調(diào)素檢測(cè)試劑盒怎么收集和保存樣品?
  鐵調(diào)素檢測(cè)試劑采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被鐵調(diào)素(Hepcidin)抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。
 
  用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色。顏色的深淺和樣品中的鐵調(diào)素(Hepcidin)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度。
 
  鐵調(diào)素是一種在2000年被發(fā)現(xiàn)的由HAMP基因編碼并在肝臟中表達(dá)的肽類激素,由于其肝臟表達(dá)和抗微生物活性而被稱為“hepcidin”,它控制十二指腸內(nèi)鐵的攝取和巨噬細(xì)胞釋放的鐵,并可能參與鐵向不同器官的分布。
 
  鐵調(diào)素被認(rèn)為在阻斷下列血液流入血漿中具有至關(guān)重要的作用:十二指腸吸收,巨噬細(xì)胞釋放,肝細(xì)胞儲(chǔ)存鐵的動(dòng)員,以及與炎癥貧血有關(guān)的一切。在與感染自身免疫性疾病,危重疾病,肥胖和急性心肌梗塞等炎性疾病相關(guān)的貧血中也觀察到異常升高的hepcidin水平。
 
  樣品收集、處理及保存方法:
 
  1、血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
 
  2、血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
 
  3、細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
 
  4、組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
 
  5、保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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