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促紅細胞生成素酶免檢測試劑盒
（德國IBL  NM56011）

預期用途
促紅細胞生成素（EPO）酶免檢測試劑盒用于人血清中EPO的定量檢測，用于體外診斷，還可輔助貧血癥和紅血球增多癥的診斷。隨著重組EPO的出現(xiàn)，它可作為生物治療增加紅細胞數(shù)量，那么EPO試驗就可用于輔助貧血癥病人的預測和用藥過程的觀察。
 
簡介
EPO是分子量為30000-340000道爾頓的糖蛋白，人EPO是由165個氨基酸組成的多肽，包含有一個O-連接和3個N-連接的糖鏈。重組EPO在免疫試驗中是天然蛋白的良好替代品。血清中的EPO水平由蛋白的生成率和清除率決定，90%的EPO由成人腎臟的腎小管細胞產(chǎn)生，組織氧化中會降低?，F(xiàn)象表明，這些細胞中用于檢測血氧飽和度的蛋白是一種血紅素基團，隨著血漿中的氧分壓的降低，EPO濃度會增加，這也提示我們在正常的細胞內(nèi)，血清中EPO濃度與紅細胞量呈負相關(guān)關(guān)系。

血清中EPO濃度的定量檢測可輔助貧血或紅細胞增多癥的診斷。再生障礙性貧血，溶血性貧血和貧血都是由于缺鐵導致海拔血清EPO。而繼發(fā)性貧血患者體內(nèi)的EPO水平是由于腎功能衰竭和其他疾病如獲得性免疫缺陷綜合征（AIDS）引起，這就是zui有可能由于腎臟受損而引起的EPO大量產(chǎn)生的原因。低濃度的EPO可對腎移植排斥反應做出早期預警，還可以用于監(jiān)測艾滋病人使用AZT的治療過程，EPO濃度的增加表明貧血與AZT治療相關(guān)聯(lián)是由于紅細胞發(fā)育不全或apliasia紅血球增多癥，或原發(fā)性紅細胞增多癥（紅細胞量增加）起因于紅細胞未受到刺激，因此，血紅蛋白的增加引起EPO的減少，導致血清中EPO水平降低。繼發(fā)性紅血球增多癥，也是總紅細胞數(shù)增加，循環(huán)EPO水平提高的生理反應，引起了組織缺氧，缺氧因素可能有肺纖維化，心血管疾病，長期暴露在高海拔地區(qū)，異常形式的血紅蛋白和藥物治療。一些腫瘤也會產(chǎn)生EPO，這種情況下，EPO可作為監(jiān)測有效治療的腫瘤標記物。
 
實驗原理
促紅細胞生成素（EPO）酶免檢測試劑盒采用的是雙位點酶聯(lián)法，檢測具有生物活性的EPO氨基酸鏈，采用看兩種不同的鼠單抗與人EPO特異性結(jié)合。一個是生物標記的鼠單抗，另外一個是HRP標記鼠單抗。
試驗中，標準品，質(zhì)控品或是樣品與酶標抗體和生物素標記抗體一起在鏈霉親和素包被的微孔板內(nèi)孵育，孵育結(jié)束后，洗去未結(jié)合的成分，再加入TMB底物液孵育，終止液加入終止反應，顏色變?yōu)辄S色。黃色強度與樣品中的EPO成正比，標準品的濃度和OD值繪制標準曲線，質(zhì)控和樣本中的EPO濃度可直接從標準曲線上讀取。標準品已經(jīng)WHO EPO標準認證，WHO參考標準品是EPO*標準（87/684）
 
注意事項

1. 僅供體外診斷和研究
2. 實驗前，認真閱讀說明書，確保所有操作都已理解
3. 如果試劑盒有破壞的請與IBL公司或是提交您的投訴單，但自您拿到試劑盒后zui遲不超過一個星期。嚴重破損的成分不能用于實驗，將其保存好直至找到zui終的解決辦法。之后，按照*條例將其處理掉。
4. 確認批號和有效期，不要將不同批號的試劑混合，不要使用過期試劑。
5. 具備良好的實驗操作和安全意識，穿戴實驗服，一次性手套和護目鏡
6. 試劑中含有危險性物質(zhì)，可能會刺激眼睛和皮膚，見“MATERIALS SUPPLIED”和標簽。MSDS可在IBL主頁上找到或直接向IBL公司索要
7. 化學物質(zhì)或是準備試劑都應根據(jù)生化危險和安全法規(guī)來操作
8. 避免接觸終止液，可能會引起皮膚刺激或燒傷
9. 試劑A，洗滌濃縮液，EPO標準液和指控都含有環(huán)丙沙星防腐劑，對喹啉藥物敏感的人避免接觸，女性或孕婦應避免接觸環(huán)丙沙星
10. 試劑1，生物素標記的EPO抗體含有Proclin300防腐劑，處理時應戴手套，如果皮膚接觸到了，應立即用中性肥皂和清水清洗，如果眼睛接觸到了，則用水沖洗15min，若吞咽了，避免嘔吐，喝大量水，立即看醫(yī)生
11. 試劑盒中的所有試劑包括檢測過的人血清/血漿對HIV/II，HbsAg和HCV都表現(xiàn)為陰性，但是試劑中會出現(xiàn)此類病毒（HIV/II，HbsAg和HCV）或其他具有感染性的病原體的可能性都不能*被排除。因此，所有的試劑在使用和處理的過程中都應當作潛在生物有害物質(zhì)進行處理。

 
儲存和穩(wěn)定性
應在2-8℃下運輸，避免高溫或陽光直射。樣品的貯存和穩(wěn)定性以及試劑的準備都在相關(guān)章節(jié)有介紹。微孔板可保存至有效期，不用的微孔板要立即放置密封袋內(nèi)保存在2-8℃。
 
樣品采集和貯存
血清
需用人血清進行，樣品雙份檢測。400ul血清是必要的，我們建議采樣時間在7:3到12:00am，因為有文獻報道稱人的EPO是會不斷變化的。無需加入抗凝劑采集全血，允許全血在2-8℃下凝結(jié)，報道稱，與放免試驗中在冰上凝集約30%相比，室溫下凝集會導致EPO值降低。不要將樣品放置在自動除霜冷凍機內(nèi)，使用前，所有樣品應平衡至室溫，混合均勻，避免采用溶血或脂血樣品
貯存條件：2-8℃，24h
         -15℃，12個月
避免高溫或是陽關(guān)直射，避免反復凍融


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